Holttestből származó "Calamari" amiloidogén fibrin aggregátumok.Tüskeprotein-patológia biomérnöki SARS-CoV-2-nek kitett holttestektől.
Írta: KEVIN W. MCCAIRN PH.D.
2025. Május 10.
“Szerzők: Kevin W. McCairn, Ph.D., Kevin McKernan Ph.D., Shojiro Kato M.D., Charles Rixey nyugalmazott (USMC-CBRN)
Absztrakt
Ez a jelentés a post mortem emberi holttestekből származó mintákból kinyert rendellenes fibrinszerű aggregátumok előzetes törvényszéki elemzését mutatja be. Bruttó morfológiai vizsgálat, krioszekciós szövettan, fluoreszcens festés, pásztázó elektronmikroszkópia (SEM), elemanalízis (EDX), valós idejű PCR, Raman-spektroszkópia és valós idejű, rázással indukált konverzió (RT-QuIC) kombinációjával a mintákat az amiloidogén és proteáz-rezisztens fibrinképződéshez kapcsolódó biokémiai és ultrastrukturális jellemzők szempontjából vizsgáltuk. Az eredmények arra utalnak, hogy a vérrögminták a kóros fibrin remodellinggel összhangban lévő abnormális fehérjeaggregáció jellemzőit mutatják, beleértve a fokozott autofluoreszcenciát, a béta-lemezekben gazdag doméneket, a sűrű fibrilláris ultrastruktúrát és a spektrális anomáliákat. A PCR megerősítette a szövetek emberi eredetét, és előzetes bizonyítékot találtak a rekombináns tüskefehérje-expozícióval (SV40 és Ori) összefüggő molekuláris markerekre. A származás, a mintaellenőrzés és a megőrzési lánc korlátai elismertek, és további vizsgálatok javasoltak a klinikai, patológiai és etiológiai relevancia megállapítása érdekében.
Bevezetés
A legújabb jelentések felhívták a figyelmet nagy, gumiszerű, fehér, fibrinszerű vérrögök jelenlétére, amelyeket halál után emberi érrendszerből nyertek ki. Ezeket a struktúrákat balzsamozók és temetkezési vállalkozók anekdotikusan leírták, és kérdéseket vetettek fel eredetükkel, összetételükkel és potenciális kóros jelentőségükkel kapcsolatban. Válaszul ez a vizsgálat szigorú analitikai módszerek alkalmazására törekedett annak meghatározására, hogy ezek a minták egy ismert trombotikus fenotípust képviselnek-e, vagy a kialakulóban lévő patológiákkal kapcsolatos új jellemzőket tükröznek.
Ma már széles körben elismert tény, hogy a SARS-CoV-2 fertőzés a légzőszervi tropizmuson túl is szisztémás hatásokat fejthet ki, a bizonyítékok tartós koagulopátiára és fibrinszabályozási zavarokra utalnak. Különösen aggasztó a vírus tüskefehérjéjének – akár fertőzéssel, akár rekombináns célba juttató platformokon, például LNP-mRNS vakcinákon keresztül – a potenciálja, hogy katalizálja az amiloidszerű fibrinrögök kialakulását. Korábbi tanulmányok kimutatták, hogy a tüskefehérjének való kitettség fibrin(ogén) konformációs változásokat idézhet elő, amelyek ellenállnak a fibrinolízisnek, és az amiloid fibrillumokhoz hasonló béta-lemezes szerkezetet mutatnak.
Ez a jelentés azt vizsgálja, hogy a vizsgált holttestekből származó vérrögök magukon viselik-e az ilyen rendellenes fibrin morfológiai és biokémiai jellemzőit. A főbb kutatási kérdések a következők: Emberi eredetű struktúrák-e? Mutatnak-e az amiloidogenezissel összhangban lévő jellemzőket? Megkülönböztethetők-e a hagyományos fibrin embólusoktól vagy az ismert betegségekben található fehér vérrögöktől?
Multidiszciplináris forenzikus megközelítés révén ez a dokumentum katalogizálja az alvadékminták fizikai és biokémiai tulajdonságait, azzal a céllal, hogy átlátható, módszertanilag megalapozott alapot biztosítson a független felülvizsgálathoz. A mintavételi kontextus korlátai és a teljes klinikai háttér hiánya miatt az itt bemutatott eredmények feltáró jellegűek, és további kontrollált kutatások ösztönzését célozzák.
1. szakasz: A vérrögszerkezetek makroszkopikus morfológiája Kép: 1–5. dia
A holttestektől származó vérrögminták kezdeti makroszkopikus vizsgálata feltűnően anomáliás morfológiát tárt fel. A minták gumiszerűek, rostosak és gyakran tekercseltek vagy sávosak – felületi hasonlóságot mutatva a tengeri kalamárihoz. A hagyományos trombusokkal ellentétben ezek az aggregátumok nem rendelkeznek a vörösesbarna elszíneződéssel és a lamináris, eritrocita-gazdag rétegződéssel, amely gyakran megfigyelhető a posztmortem vérrögökben.
A 4K felbontású, boncolómikroszkóppal készített képek azt mutatják, hogy a szerkezetek megőrzik szilárd, szakítószilárdságukat. A minták ellenállnak a szakadásnak, mérsékelt nyomás alatt sem esnek össze, és manipuláció során megőrzik szerkezeti koherenciájukat, ami a tipikus fibringélektől eltérő összetételre utal. A belső keresztmetszetek sűrű, réteges architektúrát mutatnak, átlátszó érrendszeri lumenek nélkül, ami tovább különbözteti őket az érhez kapcsolódó trombusoktól.
Ezek a morfológiai jellemzők vagy a fehérjemátrixon belüli előrehaladott keresztkötésre, vagy a polimerizált fibrin egy szerkezetileg aberráns formájára utalnak. A megőrzött integritás és a manipulációval szembeni ellenállás felveti az amiloidogén átrendeződés lehetőségét – ezt a hipotézist a következő szakaszokban mikroszkópos és spektroszkópiai elemzéssel vizsgáljuk.
2. szakasz: Krioszekciók szövettana és fluoreszcens képalkotása Kép: 6–11.
dia. A szövetmintákat 20 µm vastagságban krioszekciózták, majd fény- és fluoreszcens mikroszkópiának vetették alá 4x és 40x nagyításban. A hematoxilinmentes képalkotás heterogén, rostos belső szerkezetet mutat, számos üreggel és réteges fibrilláris régiókkal.
A festés előtti fluoreszcencia-analízis erős és egyenletes belső autofluoreszcenciát mutatott. Kék fény gerjesztése alatt zöld emissziót figyeltek meg; a zöld csatornában történő gerjesztés vörös fluoreszcenciát indukált. Ez a széles spektrumú válasz erősen atipikus, és nagyfokú belső molekuláris rendezettségre vagy aromás aminosav-felhalmozódásra utal. Ez a viselkedés összhangban van a térhálósított fehérjehálózatokkal vagy a tirozin, triptofán vagy fenilalanin aminosavakat érintő amiloid-szerű kölcsönhatásokkal.
A béta-lemezben gazdag amiloid domének jelenlétének felmérésére tioflavin T (ThT) festést alkalmaztak. Az összehasonlító képalkotás a ThT alkalmazása előtt és után különálló „pöttyös” fluoreszcens gócokat, valamint diffúz, szakaszos fluoreszcenciát mutatott. Ezek az adatok arra utalnak, hogy az amiloidogén felhalmozódás lokalizált, de nem homogén, ami a mintán belüli mikrovérrög heterogenitására utal.
3. szakasz: Pásztázó elektronmikroszkópia (SEM) és elemi összetétel meghatározása EDX-en keresztül Kép: 12–17. diák
5 µm vastagságú krioszekciókat készítettünk SEM-hez. Alacsony nagyításnál (25x) felmértük az általános morfológiát. Nagyobb nagyításoknál (akár 5000x) fibrilláris aggregátumok sűrű, retikuláris hálózata tárult fel.
Ezek a fibrillumok noduláris topográfiát és elágazó összekapcsolódásokat mutatnak, ami összhangban van a kóros fehérje-összeszerelődésre. Figyelemre méltó, hogy rotációs csavarodást és laterális aggregációs jellemzőket figyeltek meg, amelyek az amiloid fibrin architektúra jellemzői. Ezek az ultrastrukturális eredmények alátámasztják azt a hipotézist, hogy a megfigyelt anyag nem egyszerű polimerizált fibrin, hanem egy proteáz-rezisztens, rosszul hajtogatott fehérjeaggregátum.
Az EDX-en végzett elemtérképezés nagy mennyiségű szén-, nitrogén-, oxigén- és kéntartalmat mutatott ki – ami összhangban van a fehérjetartalmú anyagokkal. Nehézfémek (pl. Fe, Zn, Cu) esetében nem észleltek szignifikáns jelet, ami kizárja az ásványi alapú aggregációt vagy szennyeződést. A szervetlen nukleációs pontok hiánya endogén biokémiai eredetet támaszt alá.
4. szakasz: PCR és Raman spektroszkópia szöveti és molekuláris jellemzők vizsgálatára Kép: 18-20. dia
A humán RNaseP transzkriptum primereit használó PCR megerősítette, hogy az alvadékból származó minták emberi eredetűek. A tüskefehérjét kódoló szekvenciákat és a plazmiddal kapcsolatos markereket (SV40, Ori) célzó további vizsgálatok késői ciklus amplifikációt mutattak, ami összhangban van a rekombináns vakcinakomponensek nyomokban jelenlévő jelenlétével. Ezek az eredmények előzetesek, és óvatos értelmezést igényelnek.
A Raman-spektroszkópia egy fő spektrális csúcsot mutatott ~1720 cm⁻¹-nél, amely eltér a kanonikus amiloid béta-lemezes jellemzőtől 1670 cm⁻¹ közelében. Ez a spektrális felfelé irányuló eltolódás megváltozott másodlagos szerkezetet, észterkötések kialakulását vagy savas aminosavak protonálódását tükrözheti. Az eredmények egy atipikus fibrillumösszetételre utalnak, amely egy új polimorf vagy hibrid aggregátumosztályt képviselhet.
5. szakasz: RT-QuIC oltási aktivitás plazmakivonatokban
Az RT-QuIC analízist alkalmazták az alvadékhoz kapcsolódó anyag oltási potenciáljának felmérésére. A fluoreszcencia intenzitásának 3D oszlopdiagramon történő vizualizációja egy 96 lyukú lemezen emelkedett ThT jelet mutatott a kísérleti lyukakban, ami összhangban van a fibrillumok képződésével, amikor emberi plazmával fertőzték meg.
A háttérjel, a kezelési műtermékek és a hígítási sorozat hiánya azonban korlátozza az értelmezést. Kinetikus sebességmodellezés és kontroll oltás nélkül az adatok szuggesztívek maradnak, de nem meggyőzőek a prionszerű aktivitásra vonatkozóan.
Következtetés
Az itt leírt rögszerkezetek rendellenes morfológiai, szövettani, ultrastrukturális és spektroszkópiai jellemzőket mutatnak. Sűrű fibrilláris architektúrájuk, autofluoreszcenciájuk, ThT-reaktivitásuk, spektrális eltolódásuk és előzetes RT-QuIC-aktivitásuk a fibrin ismeretlen körülmények közötti amiloidogén átalakulására utal.
Bár az eredmények nem véglegesek, lényeges biológiai biztonságot és kórélettani kérdéseket vetnek fel, amelyek azonnali, ellenőrzött nyomon követést tesznek szükségessé. A bizonytalan származás és a nem szabványosított gyűjtési módszertan aláhúzza a független replikáció szükségességét ellenőrzött felügyeleti lánccal.
A vakcina által kiváltott tüskefehérje expozíció és a fertőzés utáni szövődmények jelenlegi kontextusában ezek az eredmények új vagy alulismertet patológiára utalhatnak. Mint ilyenek, interdiszciplináris tudományos vizsgálatra, klinikai éberségre és átlátható vizsgálatokra szólítanak fel.”
Forrás: https://substack.com/inbox/post/163255744?utm_campaign=posts-open-in-app&triedRedirect=true
